القوة الخامسة:
● أداة مجهزة بخطوة استخلاص الحمض النووي وتنقيته
● تم تكوين الأداة بوحدة الاستخراج بالموجات فوق الصوتية
● تم تكوين الصك بآلية أوتوماتيكية بالكامل
● تم تكوين الجهاز مع تضخيم درجات الحرارة المتغيرة
● تم تكوين الأداة مع مجموعة كاشف مغلقة بالكامل
1. هل تحتاج كواشف الكشف عن الحمض النووي إلى استخلاصها وتنقيتها؟
مبدأ الكشف عن الحمض النووي هو كما يلي: تحت تأثير التمهيدي، يتم استخدام بوليميراز الحمض النووي لإجراء تضخيم التفاعل المتسلسل على قالب DNA/RNA (يتطلب النسخ العكسي لـ NA)، ثم يتم الكشف عن كمية إشارة الفلورسنت الصادرة لتحديد ما إذا كانت العينة تحتوي على الحمض النووي (DNA/RNA) للعامل الممرض المراد اكتشافه.
1) قد تحتوي العينات التي لم يتم استخلاصها أو تنقيتها على العديد من المكونات التي تؤثر على النتيجة النهائية: نوكلياز (الذي يمكن أن يذيب الحمض النووي المستهدف ويسبب نتيجة سلبية كاذبة)، والبروتياز (الذي يمكن أن يقلل بوليميراز الحمض النووي ويسبب نتيجة سلبية كاذبة)، والمعادن الثقيلة الملح (مما يؤدي إلى تعطيل سينسيز ويسبب إيجابية كاذبة)، PH حمضي جدًا أو قلوي جدًا (مما قد يتسبب في فشل التفاعل)، RNA غير مكتمل (مما يؤدي إلى فشل النسخ العكسي السلبي الكاذب).
2) بعض العينات يصعب تضخيمها مباشرة: إيجابية الجرام وبعض الطفيليات، بسبب جدرانها الخلوية السميكة والهياكل الأخرى، إذا لم تمر بعملية استخلاص الحمض النووي وتنقيته، فقد تفشل المجموعة الخالية من الاستخلاص في مثل هذه العملية. عينات.
ولذلك، يوصى باختيار مجموعة الاختبار أو الأداة التي تم تكوينها مع خطوة استخراج الحمض النووي.
2. الاستخراج الكيميائي أو استخراج التجزئة بالموجات فوق الصوتية الفيزيائية؟
بشكل عام، يمكن تطبيق الاستخلاص الكيميائي على معظم عمليات المعالجة المسبقة والتنقية.ومع ذلك، في البكتيريا إيجابية الجرام ذات الجدران السميكة وبعض الطفيليات، لا يمكن أيضًا للاستخلاص الكيميائي الحصول على قوالب حمض نووي فعالة، مما يؤدي إلى اكتشاف سلبي كاذب.بالإضافة إلى ذلك، غالبًا ما يستخدم الاستخلاص الكيميائي عوامل قوية، إذا لم يكن الشطف شاملاً، فمن السهل إدخال قلويات قوية في نظام التفاعل، مما يؤدي إلى نتائج غير دقيقة.
يستخدم التجزئة بالموجات فوق الصوتية التكسير الفيزيائي، والذي استخدمته شركة GeneXpert بنجاح، وهي مؤسسة رائدة في مجال الاختبارات في نقطة الرعاية للاستخدام البشري، ولها ميزة مطلقة في استخلاص الحمض النووي لبعض العينات المعقدة (مثل المتفطرة السلية).
ولذلك، يوصى باختيار مجموعة اختبار أو أداة تم تكوينها مع خطوة استخراج الحمض النووي.وهو الأمثل إذا كانت هناك وحدة استخراج بالموجات فوق الصوتية.
3. يدوي وشبه أوتوماتيكي وتلقائي بالكامل؟
هذه مشكلة تكلفة العمالة وكفاءة العمل.في الوقت الحاضر، لا تحتوي مستشفيات الحيوانات الأليفة على عدد كافٍ من الموظفين، ويعتبر استخراج الحمض النووي والكشف عنه عملاً يتطلب مهارات وخبرة معينة.ليس هناك شك في أن آلة استخراج وكشف الحمض النووي الأوتوماتيكية بالكامل هي الخيار الأمثل.
4. تضخيم درجة الحرارة الثابتة أم تضخيم درجة الحرارة المتغيرة؟
تفاعل التضخيم هو عبارة عن رابط للكشف عن الحمض النووي، والتكنولوجيا المهنية المستخدمة في هذا الرابط معقدة.بشكل تقريبي، يتم استخدام الإنزيمات لتضخيم الحمض النووي.في عملية التضخيم، يتم الكشف عن إشارة الفلورسنت المضخمة أو إشارة الفلورسنت المضمنة.وبشكل عام، كلما ظهرت إشارة التألق مبكرًا، زاد محتوى الجين المستهدف في العينة.
التضخيم في درجة الحرارة الثابتة هو تضخيم الحمض النووي عند درجة حرارة ثابتة، في حين أن التضخيم في درجة الحرارة المتغيرة هو تضخيم دوري بشكل صارم وفقًا لتمديد التمسخ والتليين.تم تنفيذ وقت التضخيم بدرجة حرارة ثابتة، في حين يتأثر وقت التضخيم بدرجة الحرارة المتغيرة بشكل كبير بمعدل ارتفاع وانخفاض درجة حرارة الجهاز (في الوقت الحاضر، تمكنت العديد من الشركات المصنعة من إجراء 40 دورة من التضخيم في حوالي 30 دقيقة).
إذا كانت ظروف المختبر جيدة والتقسيم صارم، فمن المعقول القول إن فرق الدقة بين الاثنين لن يكون كبيرًا.ومع ذلك، فإن التضخيم في درجات الحرارة المتغيرة سوف يؤدي إلى تصنيع المزيد من منتجات الحمض النووي في وقت أقصر نسبيًا.بالنسبة للمختبرات التي ليس لديها تقسيم صارم للمناطق وموظفي تدريب محترفين، سيكون خطر تسرب هباء الحمض النووي أكبر، وتحدث النتيجة الإيجابية الكاذبة بمجرد حدوث التسرب، وهو أمر يصعب للغاية التخلص منه.
بالإضافة إلى ذلك، يكون تضخيم درجة الحرارة الثابتة أيضًا أكثر عرضة للتضخيم غير المحدد عندما تكون العينة معقدة (درجة حرارة التفاعل النسبية أقل، وكلما ارتفعت درجة حرارة الامتداد، كانت خصوصية الارتباط التمهيدي أفضل).
وبقدر ما يتعلق الأمر بالتكنولوجيا الحالية، فإن تضخيم درجات الحرارة المتغيرة أكثر موثوقية.
5. كيف يمكن تجنب خطر تسرب منتجات تضخيم الحمض النووي؟
في الوقت الحاضر، تختار العديد من الشركات المصنعة أنبوب PCR من النوع الغدي كأنبوب تفاعل الحمض النووي، والذي يتم إغلاقه عن طريق الاحتكاك، ويصل تمسخ درجة الحرارة في تمسخ درجة الحرارة المتغير في تضخيم PCR المتغير لدرجة الحرارة إلى 90 درجة
درجة مئوية .تمثل عملية التمدد المتكررة بالحرارة والانكماش بالبرد تحديًا كبيرًا لإغلاق أنبوب PCR، ومن السهل نسبيًا أن يسبب أنبوب PCR من النوع الغدي التسرب.
يفضل اعتماد التفاعل باستخدام مجموعة/أنبوب مغلق تمامًا لتجنب تسرب منتج التفاعل.سيكون الأمر مثاليًا لو أمكن التوصل إلى مجموعة محكمة الغلق بالكامل لاستخراج الحمض النووي واكتشافه.
لذا فإن آلة استخراج وكشف الحمض النووي الأوتوماتيكية بالكامل الجديدة من شركة New Tech تتمتع بالخيارات الخمسة المثالية المذكورة أعلاه.
وقت النشر: 09 أغسطس 2023
